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耗材怎么收费?
耗材主要是试剂盒,一个试剂盒包含10张芯片和对应所需的缓冲液、裂解/电泳液等试剂具体售价请联系销售人员。
设备使用有特殊要求吗,比如实验室环境,特殊操作等?
使用时实验室温度确保在 5-35 C°之间,相对空气湿度≤80%之间。如果温度、湿度未达到要求,要打开空调、除湿机或其他相关设备,直到达到要求再开始实验。 操作过程中使用一次性乳胶手套,注意防尘操作,在实验过程中所有的关于芯片的操作一定要注意不要剐蹭到胶面。移动芯片时使用拇指与食指捏住芯片长边两端或者使用镊子夹住芯片一端,保持胶面朝上防止芯片污染破损。 相较于传统western blot,本技术无需转膜,故而实验操作更方便也更容易操控,您收到设备后,我们会安排技术工程师到现场安装调试,提供1-2天的操作使用培训,您不用担心。
实验还需要用到哪些设备呢?贵公司有售卖吗?价格多少?
整体实验还会用到光学显微镜、水平摇床、水浴锅、迷你玻片离心机、芯片扫描仪/共聚焦显微镜等,多数为实验室/平台常备仪器,其他精密仪器,以及客户专项实验希望搭配的设备我们也有售卖,采购了MONO-X1的用户,采购配套仪器可适当优惠;具体销售资料与报价请与对接您的销售人员联系。
购买后短期内不熟悉设备使用,有相关完善措施吗?
①在安装机器的时候,我们会有技术人员提供1-2天的操作使用培训,也会给接受培训的人员留下操作手册、各类操作视频; ② 在后续的使用过程中,我们会在用户遇到疑难操作问题时提供技术咨询服务。
将单细胞悬液滴落到芯片上进行单细胞捕获,如何确定落到微孔里的是单细胞?
目前常备芯片孔径有30um和60um两种,能够捕获绝大部分的目的细胞,只需要根据目的细胞的大小选择合适的芯片。单细胞捕获过程可以在明场光学显微镜下进行操作,通过显微镜观察细胞的落孔情况。 我们先将芯片放置于显微镜下,然后将单细胞悬液均匀地滴落到芯片上,细胞依靠重力掉落到微孔内,落孔率符合泊松分布,正常情况下单细胞落孔率在80%以上,个别孔为2-3个细胞。这个过程中可以根据样品细胞的状态,通过延长落孔时间或者调整悬液浓度,进一步提高单细胞的落孔率。细胞落孔完成后,清洗掉表面的残余悬液,再进行后续实验。由于落入多个细胞的孔径得到的蛋白表达数据有明显差异且数量有限,可以通过智能软件的处理舍去,就得到了单细胞靶蛋白的表达数据。
如何选择适合的芯片规格?例如30um孔径的芯片适用于多大直径的细胞?
芯片孔径大小为细胞大小的1.5-3 倍为最佳。即最适用于30um芯片的是10-20um的细胞,最适用于60um芯片的是20-40um的细胞。 影响单细胞落孔率的因素除了芯片孔径,还有单细胞悬液的密度。我们常使用的单细胞悬液浓度为10⁵/ml,可根据样品状态进行调整,特殊情况下还可以采用显微上样的方式。故10um以下的细胞依旧适用于30um的芯片,但需要适当调高悬液的密度,例如调整成10⁶/ml,同理40um以上的细胞可选用60um的芯片。
单细胞western凝胶电泳得到的条带与传统western 得到的条带有什么不同?
(直接发实图)单细胞western得到的条带类似彗星,具体图片可以参考发表在Cell上的文章《Rapid Generation of Somatic Mouse Mosaics with Locus-Specifific, Stably Integrated Transgenic Elements》,上面有清晰的结果展示图。
一张芯片单次可检测2-10个靶蛋白,是一次性孵育10个抗体,还是需要洗脱重孵育呢?
单次检测10个靶蛋白是通过洗脱重孵育的方式实现的。目前国际上做到的极限是12个,因为剥离抗体对抗原有不可逆的损失,测试的结果表明,经过4次剥离,即使丰度再高的蛋白也检测不到了。故若一次用3种不同的激发光检测3种蛋白,经过4次洗脱重孵育,3×4=12,即可检测12个蛋白。 建议在做单细胞蛋白检测之前,先用传统方法确定目标蛋白在细胞中的表达丰度情况,按照丰度从低到高进行检测。目前发表的文章一般是检测1-3个蛋白,为了得到更利于发表的数据,我们建议单次检测 1-3个蛋白,洗脱重孵育检测4-6个蛋白。