将单细胞悬液滴落到芯片上进行单细胞捕获,如何确定落到微孔里的是单细胞?
目前常备芯片孔径有30um、60um、100um,能够捕获绝大部分的目的细胞,只需要根据目的细胞的大小选择合适的芯片,特殊孔径可定制芯片。单细胞捕获过程可以在明场光学显微镜下进行操作,通过显微镜观察细胞的落孔情况。
我们先将芯片放置于显微镜下,然后将单细胞悬液均匀地滴落到芯片上,细胞依靠重力掉落到微孔内,落孔率符合泊松分布,正常情况下单细胞落孔率在80%以上,个别孔为2-3个细胞。这个过程中可以根据样品细胞的状态,通过延长落孔时间或者调整悬液浓度,进一步提高单细胞的落孔率。细胞落孔完成后,清洗掉表面的残余悬液,再进行后续实验。由于落入多个细胞的孔径得到的蛋白表达数据有明显差异且数量有限,可以通过智能软件的处理舍去,就得到了单细胞靶蛋白的表达数据。
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