资源中心

常见问题

图片名称

单细胞western对抗体有特殊要求吗？和传统western的抗体孵育有何不同？

图片名称

传统western能够孵育的抗体都可以用于单细胞western。单细胞western的抗体孵育过程和传统western 基本一致，室温下先孵育一抗，然后荧光二抗。区别在于单细胞western不需要转膜，电泳分离结束后，机器会通过紫外光照射将蛋白固定在芯片的凝胶层里，这是该专利技术的核心。新型光敏凝胶材料的蛋白固定率可以达到93.8%，蛋白损失小且背景荧光低，故可以直接在芯片上进行抗体孵育。

图片名称

设备能够检测的最低蛋白含量是多少？

图片名称

目前单细胞western最低检测灵敏度是27000个蛋白拷贝数，分子量范围约10-180KDA。

图片名称

利用单细胞western检测膜蛋白，需要特殊的制样流程吗？

图片名称

无论是检测膜蛋白还是胞内蛋白，都只需要把样品制作成单细胞悬液即可。

图片名称

完成抗体孵育的芯片的保存条件是什么？能否反复采集信号？

图片名称

芯片保存同正常荧光样品一样阴凉避光即可，为了获取更有效的信号数据，建议尽快检测。正常条件下，信号重复采集5次以内，荧光强度没有太大变化。

图片名称

如果在蛋白上做一些复杂的修饰，是否可以检测出修饰后的蛋白，以及蛋白修饰前后的区别？

图片名称

检测的关键在于抗体，只要有合适的抗体，即使修饰前后的蛋白分子量差别较小，条带基本重叠也没有关系，通过修饰前后蛋白携带的不同的荧光基团，就可以将表达量区分开。

图片名称

单细胞western实验需要用到哪些设备和耗材？

图片名称

实验所需设备有：单细胞免疫印迹仪、共聚焦显微镜/共聚焦芯片扫描仪、光学显微镜、水平摇床、水浴锅、抗体孵育槽（袋）、移液枪，耗材有：芯片及试剂、抗体、离心管、ep管。

图片名称

信号扫描只能用共聚焦显微镜吗，普通荧光显微镜能够显示吗？

图片名称

使用普通荧光显微镜或许能够看到高表达的荧光，低丰度的就不可以。由于单细胞内蛋白的量是亚皮克级别，荧光强度很低，故需要用到共聚焦显微镜，或者荧光芯片扫描仪。

图片名称

单细胞western上样需要多少细胞？单细胞悬液的密度有什么要求？上样方式有哪些？

图片名称

单细胞悬液的上样量一般在400-600uL，密度在10⁵/ml效果最佳，10000-100000个细胞/ML均可。通常的上样方式是滴定自由落孔，样品很珍贵的情况下，可以采用显微操作的方式，没有落入孔的细胞可以尝试回收。

< 12345 >