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常见问题

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抗体特异性不强做出来有杂带的话，软件可以设置吗？

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目前蛋白分析软件可以自动识别泳道，无法自动识别杂带，可以手动选取需要扫描的区域。

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单细胞western的实验步骤有哪些？

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基本步骤如下： 第一步：将组织样本制成单细胞悬液； 第二步：将单细胞悬液滴加在芯片上，静置十分钟左右，在光学显微镜下观察细胞落孔情况； 第三步：将芯片放置于MONO-X1一体机的电泳槽内，设置实验条件，添加特制缓冲液，运行仪器，约10-15分钟； 第四步：芯片取出，进行一抗二抗孵育； 第五步：利用荧光扫描仪或者共聚焦显微镜采集信号，信号采集后若需再次孵育，则洗脱重孵育，再采集信号； 第六步：利用智能分析软件进行分析。

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芯片可以保存吗？怎么保存？可以保存多久？

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芯片闭光干燥，4C°冷藏可以保存9个月，建议开封后1个月内使用完。

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能否在一张芯片同时做内参？

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一张芯片若同时滴加两种悬液，容易出现交叉感染影响实验结果。若需要做内参，建议以下两种方案： ① 同一批样品细胞用不同的芯片进行检测； ② 在一张芯片上同时孵育靶蛋白和内参蛋白，用不同的荧光进行检测。

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此单细胞设备是如何检测例如泪液或者唾液这样的微量蛋白的？最微上样量能够达到多少？

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检测泪液、唾液这样的微量蛋白使用的是微量样本芯片（在预研阶段），而非单细胞芯片。一般采用显微操作的方式，用显微针把样本从组织或者细胞里面吸取出来，注射到芯片上，再进行蛋白的免疫印迹分析。 最微量能够达到多少，取决于目标蛋白的丰度和抗体的孵育情况，暂无数据参考。

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可以同时检测几种蛋白，如何选择抗体？

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可以同时检测多少蛋白除了考量抗体特异性外，也取决于检测设备的通道数量，例如我们最常用的芯片扫描仪有三个检测通道，我们一般就最多同时检测3种蛋白。 为了减少二抗孵育时的交叉吸附，做多重荧光定量检测时，建议选择种属差异比较大的一抗。例如同时检测三种蛋白，可以选择小鼠、山羊、兔这类种属差异比较大的一抗，再孵育对应荧光标签的二抗。一抗孵育完成后，多次反复清洗芯片再上二抗，就能够通过采集荧光信号进行目标蛋白的分析，包括条带上的位置信息，荧光强度信息等。 因为western可以通过荧光强度表现蛋白的分子量和丰度信息，无论是单细胞蛋白还是微量样本，都可以进行荧光定量western分析。

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一张芯片可以上多组样品吗？

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不建议，此类操作比较困难，容易出现交叉感染而影响实验结果。

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如果要定制芯片，有哪些选择？

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现有芯片规格能够覆盖绝大部分细胞，若仍需定制，具体方案和价格具体讨论。

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