可以同时检测几种蛋白,如何选择抗体?


可以同时检测多少蛋白除了考量抗体特异性外,也取决于检测设备的通道数量,例如我们最常用的芯片扫描仪有三个检测通道,我们一般就最多同时检测3种蛋白。
为了减少二抗孵育时的交叉吸附,做多重荧光定量检测时,建议选择种属差异比较大的一抗。例如同时检测三种蛋白,可以选择小鼠、山羊、兔这类种属差异比较大的一抗,再孵育对应荧光标签的二抗。一抗孵育完成后,多次反复清洗芯片再上二抗,就能够通过采集荧光信号进行目标蛋白的分析,包括条带上的位置信息,荧光强度信息等。
因为western可以通过荧光强度表现蛋白的分子量和丰度信息,无论是单细胞蛋白还是微量样本,都可以进行荧光定量western分析。