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Kang CC, Yamauchi KA, Vlassakis J, Sinkala E, Duncombe TA, Herr AE. Single cell-resolution western blotting. Nat Protoc. 2016 Aug;11(8):1508-30. doi: 10.1038/nprot.2016.089. Epub 2016 Jul 28. PMID: 27466711; PMCID: PMC5511750.

Time:

Nov 06,2023

描述了如何对单个细胞进行蛋白质免疫印迹以测量蛋白质表达水平和蛋白质状态的细胞间变异。与传 统的蛋白质印迹一样，单细胞蛋白质免疫印迹（scWB）对于缺乏选择性抗体（例如，亚型）的蛋白质靶标
以及来自完整细胞的背景信号混淆的情况特别有用。scWB 在微器件上进行，该微器件包含一系列微孔，这些微孔模塑在聚丙烯酰胺凝胶（PAG）的薄层中。凝胶层在 PAGE 期间既可用作分子筛分基质，又可在免疫探测期间用作印迹支架。scWB 涉及五个主要阶段：（i）细胞重力沉降到微孔中;（ii）每个微孔中细胞的化学裂解;（三） 每一单细胞裂解物的页数;（iv）凝胶暴露于紫外线下以将蛋白质印迹（固定）到凝胶基
质中;和（v）固定化蛋白质的凝胶内免疫探测。多重检测可以通过使用抗体混合物探测并使用抗体剥离/ 再造技术来实现，从而能够检测每个细胞中的 10 多种蛋白质。

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Duncombe TA, Kang CC, Maity S, Ward TM, Pegram MD, Murthy N, Herr AE. Hydrogel Pore-Size Modulation for Enhanced Single-Cell Western Blotting. Adv Mater. 2016 Jan 13;28(2):327-334. doi: 10.1002/adma.201503939.

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Quadri SM. Single-cell western blotting. Methods Mol Biol. 2015;1312:455-64. doi: 10.1007/978-1-4939-2694-7_46. PMID: 26044027.

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